Démographie : Lachaud décrit des colonies comptant jusqu’à 1  200 ouvrières. Une telle population paraît difficilement atteignable avec une colonie monogyne en captivité. En moyenne, 470 individus sont recensés dans les colonies in natura ; cette valeur semble plus accessible.

Particularités comportementales : De par son organisation sociale, l’espèce (en particulier les populations polygynes) se montre extrêmement dominante et omniprésente dans certains milieux.
Ectatomma tuberculatum a été largement étudiée, car elle est considérée comme un bon agent de lutte biologique contre les ravageurs du coton, du café, du cacao et du maïs. Les colonies sont relativement peu populeuses, mais on recense jusqu’à 1 500 nids par hectare, une densité très importante. Cette densité est rendue possible par un très faible niveau d’agressivité intra-spécifique, permettant le partage des zones de récolte entre plusieurs colonies.

L’espèce est semi-arboricole. Elle est beaucoup plus fréquente sur les arbustes bas et les plantes grimpantes que dans la haute canopée. Des ouvrières peuvent être observées à toute heure, mais l’essentiel de l’activité est nocturne, avec un départ massif du nid au crépuscule.
E. tuberculatum adopte une stratégie de fourragement majoritairement solitaire : chaque ouvrière cherche sa propre nourriture sans coordination de groupe. Ce sont des prédatrices actives de petits arthropodes et des charognardes de grands arthropodes morts. Elles peuvent chasser à l’affut : rester immobile pendant un long moment, en attendant le passage d’une proie pour la happer.
Un polyéthisme d’âge est observé : les ouvrières n’occupent pas les mêmes tâches tout au long de leur vie. L’espèce ne possède pas de jabot social ; elle transporte les liquides sucrés en maintenant une goutte en tension entre ses mandibules pour la ramener au nid. Durant ce transport, l’ouvrière est moins mobile, ce qui a favorisé une forme de parasitisme opportuniste : la cleptobiose. Une autre espèce de fourmi, Crematogaster limata, s’est spécialisée dans le vol des ouvrières rentrant au nid. Lors d’un raid, les Crematogaster s’engouffrent dans l’entrée du nid, interceptent les butineuses et grimpent sur elles pour dérober leur liquide sucré. Il n’y a pas d’agressivité interspécifique lors de cette action.
Diana Wheeler suggère que ces interactions cleptobiotiques pourraient représenter une forme primitive de parasitisme social.

Les ouvrières possèdent des ovarioles, dont la maturation dépend en partie de l’âge. Durant les quatre premières semaines de la vie de l’imago, les ovarioles se développent. Leur nombre dépend de la taille des individus. Ils atteignent leur développement maximal vers 45 jours, puis entament une phase de déliquescence, pour devenir atrophiés avant l’âge d’un an.
Grâce à ce mécanisme, les jeunes ouvrières produisent des hormones déclenchant la ponte d’œufs trophiques, très riches en vitellogénine (une protéine hautement bio-assimilable), qui servent de source nutritive à la colonie.

Dans la province de Veracruz, au Mexique, les colonies polygynes d’Ectatomma tuberculatum peuvent abriter une espèce parasite : Ectatomma parasiticum.
Sur le plan phylogénétique, E. tuberculatum est paraphylétique, car E. parasiticum est imbriquée dans ses lignées génétiques. Cela suggère que E. parasiticum a évolué directement à partir d’une population isolée de E. tuberculatum.

E. tuberculatum entretient de nombreuses relations mutualistes avec les plantes. Ces dernières développent des nectaires extrafloraux (glandes situées en dehors des fleurs) produisant du nectar pour attirer les fourmis. Celles-ci obtiennent alors une nourriture facile, et en retour, leur présence éloigne les herbivores.
Plusieurs espèces végétales sont connues pour entretenir ce type d’interactions : Epidendrum denticulatum, Passiflora spp., Inga spp., Tocoyena formosa, Caryocar brasiliense… La relation peut aussi se complexifier avec certaines espèces de lépidoptères. Enfin, E. tuberculatum est également parasitée par plusieurs espèces de guêpes eucharites, de mouches phorides et de nématodes.

Venin et piqûres : La piqûre d’Ectatomma tuberculatum est rare : les ouvrières n’utilisent leur aiguillon qu’en cas d’urgence, et non pour la chasse. Cependant, leur venin est cytotoxique et particulièrement nocif. Il est composé de 48 protéines, parfois immunogènes, dont l’ectatomine, et présente l’une des plus faibles DL50 chez les fourmis (0,3 mg/kg). Cette espèce est donc à haut risque pour les éleveurs : des cas de piqûres entraînant des cicatrices durables ont été recensés, et un risque de choc anaphylactique est présent.

Alimentation : E.tuberculatum chasse un grand nombre d’insectes. Lachaud rapporte qu’elles n’hésitent pas à se nourrir d’autres fourmis, comme des Atta spp, tandis que d’autres études montrent une appétence pour la consommation d‘Azteca alfari. Une grande part de leur régime repose sur des liquides sucrés : issus des fleurs, des nectaires extrafloraux, de miellat d’Homoptère ou des fruits.

Essaimage : Kaspari suggère des essaimage(s) d’avril/mai à décembre, avec une activité particulièrement intense en août. On peut supposer que, comme d’autres Ectatomma, cette espèce pratique le female calling. Dans certaines localités, les gynes fraîchement fécondées peuvent retourner dans leur nid natal ou se faire adopter par une colonie étrangère. Pour les populations les plus polygynes et les plus polydomes, il est probable qu’un autre mode de dispersion existe en plus des vols nuptiaux : le bouturage.

Gynie : Variable, certaines population présentes des polygynies fonctionnelles primaires et secondaires (les colonies pourraient accepter facilement des reines étrangères), tandis que d’autres sont strictement monogynes.
En moyenne, il y a dans les populations polygynes 4 gynes par colonie, la plus grande colonie recensée en comportait 26. Le nombre de gynes influence directement la démographie de la colonie, car il n’y a aucune hiérarchie de dominance ou comportement agressif observé entre les reines, et elles pondent ainsi toutes activement.

Au-delà de 3 reines, cependant, la croissance du nombre d’ouvrières ne suit pas linéairement. Les colonies polygynes secondaires sont alors des mosaïques composées de plusieurs lignées. Il n’y a pas de discrimination (népotisme) au sein des colonies comportant plusieurs lignées.

Fondation : Semi-claustrale ; les reines chassent des insectes et récupèrent des liquides sucrés régulièrement afin de nourrir leur couvain, avant l’arrivée des premières ouvrières. Après l’arrivée de la première génération, la gyne peut continuer à fourrager pour aider sa colonie. Dejean rapporte que ce phénomène se produit jusqu’à atteindre environ 12 ouvrières.

Cycle de développement : Probablement homodynamique (donc sans diapause), par homologie avec d’autres espèces d’Ectatomma.